人纤连蛋白(FN)科研ELISA试剂盒 定量检测

【纤连蛋白(FN)简介】：是细胞外基质的一种高分子量（约500-600 kDa）糖蛋白，与称为整合素的跨膜受体蛋白结合。纤连蛋白还与其他细胞外基质蛋白结合，如胶原蛋白、纤维蛋白和硫酸肝素蛋白多糖。纤连蛋白以蛋白二聚体的形式存在，由两条几乎相同的多肽链组成，通过一对C端二硫键连接。每个纤连蛋白亚单位的氨基酸分子量为~230-~275 kDa，包含三种类型的模块：I型、II型和III型。

检测前准备工作：

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2. 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象；放置室温，轻摇均匀，待结晶溶解后再配置洗涤液。可将20ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释配置成400ml工作浓度的洗涤液，未用完的放回4℃

3. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

检测原理：试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被纤连蛋白（FN）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的纤连蛋白（FN）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

人纤连蛋白(FN)科研ELISA试剂盒 定量检测组成：（检测范围请参考说明书）

注意：使用前请检查试剂盒中试剂的标签和数量与表格是否一致。 

实验需要但未提供的材料及耗材：

1、酶标仪（建议仪器使用前提前预热） 

2、精密移液器、吸头、加样槽 

3、蒸馏水或去离子水 

4、洗瓶或者自动洗板机 

5、37℃水浴锅或恒温箱 

6、EP 管 

7、无粉一次性乳胶手

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 人纤连蛋白(FN)科研ELISA试剂盒 定量检测操作流程如下：

【平衡试剂盒至常温】：取出实验过程中所需板条，剩余半条用自封袋密封放回4摄氏度。

【加样】：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。在样本孔先加样本10μl再加稀释液40μl，（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
【加酶】：标准品孔和样本孔总每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗原100μL空白孔除外。
【温育】：用封板膜封住反应孔，37℃恒温箱温育60分钟。
【配液】：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
【洗涤】：小心揭掉封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置60秒后甩去洗涤液，吸水纸上拍干。如此重复5次（也可用洗板机洗板）。

【显色】：每孔先加入底物溶液A 50μl，再加入底物溶液B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光孵育15分钟。
【终止】：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
【测定】：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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