植物黄烷酮3-羟化酶(F3H)ELISA检测试剂盒

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样品收集、处理及保存方法：

1.  样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2.  标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。

3.  植物萃取液或其它相关样本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测。

4.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品：

1.      酶标仪（450nm）

2.      高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.      37℃恒温箱

植物黄烷酮3-羟化酶(F3H)ELISA检测试剂盒使用注意事项：1. 本试剂盒取出的试剂在室温条件下使用，溶液应轻轻摇匀后使用。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，这属于正常现象，加热使结晶溶解后再配制。2. 底物液使用前建议先行检查，若溶液颜色发蓝则已失效，弃去。3. 以上标准孔及待查样品均建议做复孔，每次测定应同时制作标准曲线。4. 板条开封后剩余板条要密封好，保持板条干燥。5. 不同批号的试剂盒组分不能混用。6.正确拿酶标板：不要接触板的底部，否则会影响度数。

植物黄烷酮3-羟化酶(F3H)ELISA检测试剂盒操作步骤：

【标准品的加样】：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。
【加样】：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
【加酶】：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。
【温育】：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
【配液】：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
【洗涤】：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
【显色】：每孔先加入底物溶液A 50μl，再加入底物溶液B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。
【终止】：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
【测定】：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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